在現(xiàn)代分子生物學(xué)研究中,PCR技術(shù)因其高效、靈敏的特點而被廣泛應(yīng)用于基因擴增與檢測。隨著科研需求的日益增長,市場上出現(xiàn)了多種即用型PCR試劑盒,這些產(chǎn)品不僅簡化了實驗流程,還提高了結(jié)果的穩(wěn)定性和重復(fù)性。本文將介紹常見的
即用型PCR試劑盒所采用的主要載體類型。
1.Taq DNA聚合酶
作為一代也是經(jīng)典的PCR用酶,Taq DNA聚合酶是從水生嗜熱菌中提取出來的一種耐熱蛋白質(zhì)。它能夠在較高溫度下保持活性而不變性,非常適合于需要反復(fù)加熱冷卻循環(huán)的PCR過程?;赥aq酶開發(fā)的即用型PCR試劑盒適用于大多數(shù)常規(guī)目的的DNA段擴增,如基因克隆、序列分析等。
2.Pfu DNA聚合酶
相較于Taq酶,Pfu DNA聚合酶具有更高的保真度,這意味著它在復(fù)制過程中引入錯誤的概率更低。這對于要求高度準(zhǔn)確性的應(yīng)用場合尤為重要,比如定點突變構(gòu)建或者全長基因合成。使用Pfu酶制備的即用型PCR試劑盒通常包含優(yōu)化后的緩沖體系以及dNTPs混合物,以進一步提升擴增效率及產(chǎn)物質(zhì)量。
3.KOD-Plus-DNA聚合酶
KOD-Plus-是一種來源于南極細(xì)菌的嗜熱DNA聚合酶,擁有高的熱穩(wěn)定性和強大的延伸能力。這使得它特別適合于大規(guī)模并行測序項目中的文庫制備工作。相應(yīng)地,專為此類應(yīng)用場景設(shè)計的即用型PCR試劑盒通常會提供預(yù)混好的Master Mix,方便用戶直接加入引物即可開始實驗。
4.Bst DNA聚合酶
雖然不是傳統(tǒng)意義上的“即用型”,但提到PCR相關(guān)載體時不得不提Bst DNA聚合酶。這是一種大段恒溫擴增技術(shù)中使用的關(guān)鍵成分之一,能夠在恒定溫度下完成長達數(shù)千個堿基對的目標(biāo)序列擴增。盡管操作條件特殊且成本相對較高,但對于某些特定研究仍然具有不可代替的價值。